Microscope Ă  Force Atomique L3

CombinĂ© AFM / Microscope Optique (BIO-AFM) pour l’imagerie L3 de cellules infectĂ©es et pathogènes de classe 3 

Echantillons :

Cellules fixĂ©es ou vivantes dans leur milieu de culture, bactĂ©ries, levures, macromolĂ©cules (acides nuclĂ©iques, protĂ©ines), polymères, fibres, composites, films lipidiques, vĂ©sicules lipidiques (GUV, LUV), vĂ©sicules extracellulaires (exosomes), structures biologiques purifiĂ©es (capsides virales par exemple), bactĂ©riophages, « virus-like particles Â» et virus de classe 2 et 3. 

  • Taille des plus petits objets dĂ©tectables en surface: quelques nanomètres X et Y
  • Hauteur des objets observables: de 0.5 nm Ă  12 µm
  • Dimension des images carrĂ©es: de 50 nm Ă  100 µm
  • Taille des Ă©chantillons observables: 30 mm x 50 mm en X et Y, 5 Ă  10 mm en Z
  • PossibilitĂ© de travailler en milieu liquide ou Ă  l’air, dans une enceinte thermostatĂ©e   

 

Images AFM :

a) Virus Chikungunya

b) Bacterie

c) Cellule HEK293T

Publications:

Transportin-1 binds to the HIV-1 capsid via a nuclear localization signal and triggers uncoating.
Fernandez J, Machado AK, Lyonnais S, Chamontin C, Gärtner K, LĂ©ger T, Henriquet C, Garcia C, Portilho DM, Pugnière M, Chaloin L, Muriaux D, Yamauchi Y, Blaise M, Nisole S, Arhel NJ.
Nat Microbiol. 2019 Oct 14. doi: 10.1038/s41564-019-0575-6.

Figure : In vitro reconstituted HIV-1 proteins using recombinant capsid were contacted with purified Transportin. The images taken by Atomic Force Microscopy illustrate the deformations and breaks by HIV-1 capsid representing (left to right) 10, 20 and 40 min after injection.

http://insb.cnrs.fr/fr/cnrsinfo/les-mecanismes-de-desassemblage-et-dimport-nucleaire-du-vih-enfin-resolus

 

Lethality of Brucella microti in a murine model of infectiondepends on the wbkE gene involved in O-polysaccharide synthesis

Safia Ouahrani-Bettache, María P. Jiménez De Bagüés, Jorge De La Garza,Luca Freddi, Juan P. Bueso, Sébastien Lyonnais, Sascha Al Dahouk, Daniela De Biase, StephanKöhler & Alessandra Occhialini. 2019 , Virulence, 10:1, 868-878, DOI:10.1080/21505594.2019.1682762

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Scanner AFM Nanowizard 4 (JPK-Bruker) spĂ©cifiquement modifiĂ© pour l’environnement L3 (pas de bords coupants, scanner scellĂ© contre les projections de liquides et les vapeurs) 

Source laser 980 nm

Imagerie simultanée en optique (champ clair, contraste de phase, fluorescence) et AFM

Mode fast scanning (jusqu’à 70Hz pour des scans jusqu’à 2μm)

Platine manuelle ou motorisĂ©e 

Modes d’imagerie à l’air ou en liquide :

  • Imagerie Quantitative QI ™ permettant d’acquĂ©rir simultanĂ©ment des images topographiques et des mesures biophysiques : adhĂ©sion, Ă©lasticitĂ©, module de Young 
  • Mode contact
  • Mode contact intermittent (AC mode) avec contraste de phase, modulation de force ou frĂ©quence
  • Spectroscopie de force et cartographie

XY scan: 100ÎĽm x 100ÎĽm,

Z scan: 15ÎĽm

Porte Ă©chantillon chauffĂ© (JPK PetriDishHeater) de 18°C Ă  60 ° C, pour boĂ®tes de PĂ©tri de 35x10mm (WPI et TPP, plastique ou avec fond en verre) ou lamelles de verre de 25 mm. 

Incubation C02 pour imagerie cellules vivantes 

Injecteur double pompes dans la chambre d’incubation

Microscope Optique inversé NIKON Ti2-U avec contraste de phase et fluorescence

Objectifs : 

  • Nikon CFI Lens Achromat LWD ADL-20x Ph1
  • Nikon CFI Achromat LWD ADL-40x Ph2
  • NIKON CFI APO VC 100x oil (A.N. 1.4 DT 0.13)

Source LED blanche et Epi-Fluorescence Intensilight 100w (Hg, manuel)

Cubes filtres : 

  • GFP (Ex466 / 40, DM 495, stop filter BA 525/50)
  • mCHERRY, mRFP (Ex562 / 40, DM 593, BA 640/75 stop filter)
  • CY5, APC, DiD, Alexa Fluor 647, Alexa fluor 660 (Ex628 / 40, DM 660, BA 692/40 stop filter)

Caméra JENOPTIK Fluorescence ProgRes MFcool (2/3 “1.4 MegaPixel CCD, 1350×1024 pixel resolution, 14bit)